




Высокотехнологичные лабораторные методы диагностики дают возможность выявить множество заболеваний на самых ранних стадиях. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) — один из самых новых и точных способов диагностики. За его разработку ученый Кэри Муллис получил в 1993 году Нобелевскую премию. Сегодня этот метод хотя и считается экспериментальным, но уже широко и успешно применяется в медицине.
Метод ПЦР использует принципы молекулярной биологии. Его суть заключается в применении особых ферментов, которые многократно копируют фрагменты РНК и ДНК возбудителей болезни, которые находятся в пробах биоматериала, например в крови.
После этого работники лаборатории сверяют полученные фрагменты с базой данных, выявляют тип возбудителя болезни и его концентрацию.
ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, охлаждающем и нагревающем пробирки с пробами биоматериала. Нагрев и охлаждение необходимы для проведения репликации. Точность температурного режима влияет на точность результата.
Диагностические возможности метода ПЦР огромны, с его помощью можно выявить самые разные инфекции. Чаще всего ПЦР-метод применяют для диагностики:
Это далеко не полный список, метод ПЦР-анализа используется в разных областях медицины.
Кстати Метод ПЦР применяется не только в медицинских целях. В наши дни он используется и в иных сферах, например в криминалистике, в тех случаях, когда требуется определить, кому принадлежит найденный на месте преступления биоматериал. ПЦР иногда используется также при установлении отцовства.У диагностики методом ПЦР много плюсов:
Высокая чувствительность. Метод позволяет выявить возбудителя болезни даже при наличии нескольких молекул его ДНК, то есть на очень ранних стадиях, при хронической форме заболевания, а так же в случаях, когда болезнь никак себя не проявляет, протекая латентно.
Универсальность. Для проведения ПЦР анализа подходит почти любой биоматериал — от крови и слюны до клеток кожи.
Широкий охват. Исследование одного образца может выявить сразу нескольких возбудителей болезни.
Оперативность. Результат, как правило, готов через 5–7 часов, то есть получить заключение можно уже на следующий день после забора биоматериала.
Точность. Метод ПЦР практически никогда не дает ложноположительных или ложноотрицательных результатов, если была соблюдена технология проведения этого анализа.
Невысокая стоимость. По цене ПЦР-анализ сравним с любыми другими лабораторными анализами крови.
Однако следует понимать, что совершенных методов анализа не бывает. У ПЦР есть и минус — высокие требования к соблюдению технологии и к профессионализму лаборантов. Если образец был загрязнен, анализ может дать ложный результат. Поэтому проводить ПЦР-диагностику лучше только в самых лучших лабораториях, где внедрены системы контроля качества работы.
Для ПЦР-диагностики заболеваний на анализ берут разные виды биоматериала. Выбор зависит от типа инфекции. При анализе на ЗППП методом ПЦР берут соскоб или мазок из шейки матки или уретры, а также мочу. Для выявления герпеса, цитомегаловируса, гепатита, токсоплазмоза и ВИЧ на анализ берут кровь. При анализе на мононуклеоз и цитомегаловирус берут мазок из зева. Спинномозговая жидкость используется для анализа при поражениях нервной системы, для диагностики внутриутробных инфекций исследуются ткани плаценты, для выявления легочных инфекций — мокрота или плевральная жидкость.
Подготовка к ПЦР-диагностике напрямую зависит от типа биоматериала. Кровь сдается натощак утром. Моча также сдается утром, в лабораторных условиях, в стерильный контейнер. Перед сдачей мазка или соскоба из урогенитальной области нельзя вступать в половые контакты за несколько дней до исследования, не следует проводить спринцевания. Мазок или соскоб нельзя сдавать во время менструации и в течение 2-х дней после ее окончания.
Существует немало различных методик ПЦР-диагностики: ПЦР в реальном времени, секвенирование, пиросеквенирование, микрофлюидные технологии. Сейчас наиболее распространенным способом проведения анализа является ПЦР в реальном времени — этот метод практически не допускает ложноположительных результатов, к тому же срок обработки образцов при исследовании таким способом сокращается — результат можно получить уже через час.
Для пациента результат ПЦР-анализа может быть либо положительным, либо отрицательным. Отрицательный означает, что следов враждебной ДНК не обнаружено и человек здоров. Положительный подразумевает наличие фрагментов ДНК возбудителя болезни — это значит, что человек заражен и ему требуется лечение.
Нередко ПЦР-диагностика дает положительный результат, но пациент не чувствует никакого недомогания, а признаки болезни отсутствуют. Однако это означает не ошибку, а очень раннюю стадию заболевания. В этом случае необходимы дополнительные исследования и лечение. Если заболевание было диагностировано на столь ранней стадии, следует начинать терапию как можно скорее, ведь чем дальше зайдет болезнь, тем сложнее будет ее вылечить.
ПЦР-диагностика инфекций невероятно точна — она позволяет обнаружить возбудителя болезни, даже если в пробе находится всего одна-единственная молекула его ДНК. Именно это качество сделало ПЦР-анализ одним из эффективнейших диагностических инструментов как для определения наличия инфекции, так и для контроля за ходом лечения.
Диагностика методом ПЦР на сегодняшний день является самым эффективным способом обнаружения и идентификации возбудителей половых инфекций в человеческом организме.
В этой статье мы разберем, что такое анализ ПЦР, как и где сдать этот тест.
Вы узнаете, какова цена этого исследования, где выполняют ПЦР анализы и как готовится, когда требуется сдать ПЦР анализ.
Вы узнаете о методиках забора мазков, какой врач берет анализы на ПЦР и почему медсестра плохо берет мазки на ПЦР анализ.
Разберем ПЦР анализ: что это такое и как выполняют это исследование.
ПЦР анализ: что это такое?
ПЦР, или полимеразная цепная реакция, представляет собой метод лабораторного исследования различных биологических жидкостей.
В них происходит анализ на предмет присутствия возбудителей инфекционных, паразитарных или вирусных заболеваний.
Суть ПЦР состоит в многократном «клонировании» находящихся в исследуемом материале фрагментов ДНК инфекционного агента.
ПЦР диагностика инфекций считается наиболее быстрым, современным методом.
ПЦР диагностику используют повсеместно.
Все ведущие клиники используют диагностику ПЦР для верификации инфекционных заболеваний.
Часто пациенты спрашивают, какие именно заболевания можно выявить при помощи метода ПЦР диагностики?
Диагностика методом ПЦР используется для выявления широкого спектра возбудителей.
Такое исследование проводится одинаково для диагностики любого заболевания.
Разница может быть лишь в исследуемом субстрате.
Для этого пробирку с биоматериалом помещают в реактор, где с помощью катализаторов происходит процесс копирования молекул ДНК возбудителя инфекции.
ПЦР диагностика: расшифровка
Давайте разберем, как проводится расшифровка ПЦР диагностики.
Метод ПЦР очень быстрый и простой.
В качестве результата, вы получаете заключение врача лаборанта.
В результате четко будет прописано: получен положительный результат или отрицательный.
Ответ приходит на конкретную инфекцию.
Когда вы сдавали палитру инфекции напротив каждого возбудителя будет указано получен положительный или отрицательный результат.
Если вы сомневаетесь в результатах, покажите бланк вашему лечащему врачу.
Доктор поможет интерпретировать результат ПЦР и подберёт правильное лечение.
Помните!Исследование методом ПЦР не всегда можно использовать в медицинской практике.
Такие исследования не проводятся при контрольном тестировании после проведения лечения.
Когда берется ПЦР анализ после лечения, при разных инфекциях, можно получить положительный результат, который будет ложным.
Это связано с тем, что частички убитых возбудителей, уже неактивные, могут давать положительную реакцию.
Если вы сомневаетесь, можно ли вам сдавать ПЦР или нет, проконсультируйтесь с врачом.
Разберем, какие материалы могут быть применены для тестирования ПЦР.
Что может быть использовано в качестве материала для исследования методом ПЦР:
Врач всегда рекомендует определенные анализы.
Тем не менее, существует определенный перечень материалов, которые покажут наиболее точные результаты.
Тем не менее, существует определенный перечень материалов, которые покажут наиболее точные результаты.
Такое исследование позволяет диагностировать:
ПЦР — метод полимеразной цепной реакции для обнаружения генетического материала (фрагментов ДНК или РНК) в исследуемом материале. Активно применяется в медицине и науке. Он известен более 30 лет, а сферы его использования постоянно расширяются.
Открытый в 1983 году американским ученым и лауреатом Нобелевской премии Кэри Мюллисом, он стал настоящим прорывом в сфере ранней диагностики инфекционных заболеваний. Дорогостоящий и сложный, однако очень информативный и точный, ПЦР помогает обнаружить в организме человека вирусы и бактерии даже в единичном количестве.
ПЦР относится к молекулярно-генетическим тестам. Его работа основана на определении фрагментов ДНК и РНК возбудителей инфекции по определенной последовательности нуклеотидов в цепочке. Суть метода состоит в активизации репликации генетического материала бактерии или вируса. Чтобы запустить реакцию, достаточно единичных фрагментов ДНК или РНК патогена.
Анализ проводится в лабораторных условиях. С помощью специальных ферментных систем, специфических для искомой инфекции, ускоряется деление генетического материала патогена — каждый раз удваивается. Цепная реакция включает множество циклов. При каждом из них количество фрагментов нуклеотидных цепочек увеличивается в геометрической прогрессии. По окончании теста маркеров возбудителя становится настолько много, что определить их не составляет сложности.
Получается, если изначально в материале был фрагмент генетического материала вируса или бактерии, который было невозможно обнаружить, после ПЦР количество увеличивается в десятки раз и выявить его просто.
Метод ПЦР считается ультрачувствительным. Он отражает наличие инфекции в организме, даже если заражение состоялось недавно, иммунитет не успел на него отреагировать, а численность инфекционных агентов минимальна.
Бактерии или вирусы вносят изменения в ДНК человека, другими словами, «оставляют отпечатки». Реактивы, используемые при ПЦР, отыскивают их и заставляют многократно делиться. Поэтому установить инфицирование можно всегда, даже если заболевание развивается бессимптомно или возбудитель персистирует в латентном режиме.
ПЦР считается очень специфичным анализом. Ферментные системы нацелены на конкретный антиген и активны только против него. Достоверность метода достигает 100%. Если внутри организма нет малейших признаков искомой инфекции, то бишь, конкретной последовательности нуклеотидов (уникальна для каждого живого существа), исследование не даст положительный результат. Исключения есть, но они сведены к минимуму, поэтому ПЦР признан еще и высокоточным анализом.
Возможность сочетания ферментных систем, определения сразу нескольких видов инфекции, а также вероятность ее обнаружения в абсолютно любой биологической жидкости делает исследование универсальным. Наиболее активно ПЦР применяется в гинекологии и урологии, поскольку здесь распространены заболевания вирусной и бактериальной природы, среди которых, сложно диагностируемые и развивающиеся скрыто.
Примером активного применения ПЦР выступает тест на отцовство. Другие сферы медицины его чаще используют при симптомах инфекционных патологий, повышенном риске их хронизации, высокой вероятности заражения больного опасными для жизни вирусами (гепатит, ВИЧ).
Гинекологи, андрологи и урологи назначают ПЦР на ИППП (Инфекции, Передающиеся Половым Путем), для выявления скрытых заболеваний. Кроме того, с его помощью можно найти признаки онкологического процесса, определенные иммуноглобулины. Все сильнее набирает популярность анализ ПЦР на туберкулез, применяется для обнаружения хеликобактер пилори, как основного провокатора гастрита и язвенной болезни желудка (на ПЦР отправляют кал или желудочное содержимое).
Частные лаборатории предоставляют возможность сделать комплексный скрининг. Можно пройти обследование сразу на 6, 12 инфекций.
Таблица — О каких возбудителях информируют комплексные анализы
С помощью метода выявляют некоторых паразитов (проводят ПЦР на лямблии, описторхов, аскарид), если анализ кала показывает отрицательный результат, несмотря на наличие симптоматики. С его помощью обнаруживают возбудителя гепатитов А, B, C, D, сифилис, Эпштейна-Барра, цитомегало-, папилломавирус.
Общие правила подготовительного периода перед любым анализом ПЦР включают:
Нюансы зависят от того, какой именно биоматериал будет тестировать лаборатория. Должна сдаваться только та биологическая жидкость, которая вероятнее всего содержит наибольшие концентрации возбудителя. Если это моча, кал, мокрота, слюна, сперма, возможен самостоятельный сбор. Другие типы (мазки из цервикального или уретрального канала, ротоглотки, конъюнктивы) берет медицинский персонал в условиях медицинского учреждения.
Забор проводит лаборант одноразовой вакуумной системой или шприцем. Для тестирования достаточно 1‒2 мл. Биоматериал собирают с утра, натощак. Специфических условий подготовки нет, как и потребности снижения физических нагрузок, исключения каких-либо продуктов накануне. Единственное требование — должно пройти достаточно времени после антибиотикотерапии.
Чаще всего изучается при подозрениях на резистентные к лечению инфекции мочевыводящих органов. Биоматериал — утренняя урина, собранная вскоре после пробуждения, перед завтраком. Для доставки пробы используют стерильный контейнер с крышкой, приобретенный в аптеке или выданный лабораторией. Собирают только среднюю порцию (первую и последнюю спускают в унитаз). Сразу закрывают, транспортируют для анализа на протяжении 2 часов.
Накануне не желательно принимать диуретики или увеличивать обычный суточный объем жидкости. Женщинам нельзя спринцеваться за 3 суток. За 2 дня представители обоих полов должны отказаться от секса. Перед анализом нельзя принимать нефропротекторы с растительным составом, уроантисептики. Перед сбором мочи нужно не забыть подмыться, чтобы бактерии с наружных половых органов не попали в биоматериал.
Забор делают в лаборатории или поликлинике. Наружное отверстие уретры очищают от выделений с помощью физраствора. Специальную щетку со щетинистой головкой погружают на 2‒4 см в уретральный канал, делают циркулярное движение, извлекают приспособление и основную контактирующую часть срезают в пробирку со специальным раствором (выступает своеобразной питательной средой).
Непосредственно перед анализом за 3 часа нельзя мочиться. Запрещается проводить гигиенические процедуры с использованием антисептиков или антибактериальных растворов. Нельзя спринцеваться и заниматься сексом за 2 суток до диагностики.
Проводятся в лаборатории. Женщина занимает положение в гинекологическом кресле. Лаборант или врач с помощью физраствора убирает слизь и выделения бартолиновых желез снаружи половых органов. Если необходим мазок из влагалища, специальным зондом со щетинистой головкой делают циркулярное движение в нижней части заднего свода. Рабочую часть устройства срезают в пробирку с раствором. При заборе из цервикального канала зонд погружают вглубь шейки до 1,5 см.
ПЦР влагалищного мазка часто назначают беременным женщинам, при симптомах ИППП или повышенном риске их хронизации, а также при поисках причин бесплодия. Перед анализом нельзя иметь интимные связи, спринцеваться, использовать антисептики для подмываний или свечи с антибактериальным действием.
Берет лаборант или врач. Головкой зонда проводят по задней стенке глотки, миндалинам, небным сводам, которую затем срезают в пробирку. Анализ берут строго натощак. Перед ним нельзя использовать антибактериальные спреи или леденцы.
Для выявления возбудителя туберкулеза анализируют мокроту, которую больной собирает с утра с помощью стерильного контейнера (подходит также для ПЦР слюны). Кал также сдают в специальной емкости, причем нет смысла наполнять ее. Достаточно просто взять небольшую пробу ложкой, которой укомплектован стерильный сосуд.
Забор мазка из конъюнктивы проводит лаборант, снимая образец с поверхности нижнего века. Содержимое желудка получают аспирационным путем, при гастроскопии. На анализ могут отправить массы, или биоптат со стенки органа.
Полимеразная цепная реакция способна отразить не только наличие возбудителя, но также его примерную концентрацию в единице биоматериала (например, 1 мл крови, мочи, слюны). Выявление, а также идентификация бактерий либо вируса называется качественным ПЦР-анализом. Он может дать только 2 варианта ответа — есть возбудитель в организме или нет.
Это уместно для диагностики заболеваний даже на ранних сроках после заражения. С помощью ПЦР можно проверить наличие инфекции в крови в инкубационном периоде развития или во время «серологического окна» (когда иммунитет еще не выработал антитела, а ИФА-тест отражает отрицательный результат, несмотря на высокую вероятность заражения). Нормой по всем возбудителям считается отрицательный результат. Если он положительный — в организме есть инфекция.
Чтобы оценить концентрацию болезнетворных агентов, проводят количественные ПЦР анализы. Они указывают, сколько именно копий РНК или ДНК возбудителя обнаружено в расчете на единицу измерения биоматериала. Результат указывают в международных единицах (МЕ/мл). Количественный тест определяет:
Качественный и количественный ПЦР одинаково важны при диагностике и лечении ВПЧ, ВИЧ, гепатита С. При перечисленных заболеваниях назначают мощные противовирусные препараты, а контроль изменения концентрации возбудителя позволяет корректировать дозы, снижая риск развития побочных эффектов. Хорошим анализом считается такой, результат которого приближен к минимальному порогу чувствительности теста (10-50 МЕ/мл), однако это не исключает необходимости продолжать терапию.
Информативность ПЦР анализа и его точность актуальны при диагностике многих заболеваний. Однако метод этот сложный, а его выполнение требует строгого соблюдения техники и правил. В противном случае возможно получение не достоверного результата (ложного). Ложноположительные данные получаются при:
Ложноотрицательный результат теста возможен при неправильной транспортировке проб в лабораторию (нарушения температурного режима, воздействие внешних условий), применении непригодных для анализа реактивов.
Один из разновидностей ПЦР анализа — ПЦР real-time. Особенностью исследования является более тщательное изучение и дифференциация материала, потенциально относящегося к патологическому. Удобнее объяснить разницу на примерах.
После лечения какой-то инфекции антибиотиками в организме человека еще некоторое время будут находиться остатки патогенов (их клеточные стенки, части РНК или ДНК). Проведение обычной ПЦР сразу после лечения также даст положительный результат, но инфекции как таковой уже нет. Именно поэтому для достоверности анализа рекомендуется соблюдать интервал после терапии антибиотиками минимум в три недели.
Выполнение ПЦР real-time сразу после лечения даже при наличии фрагментов патогенов, но при отсутствии активных форм, даст отрицательный результат. То есть это более чувствительный анализ, который лишен мельчайших недостатков.
Вопрос: Где лучше сдавать анализ, в частной или государственной лаборатории?
Ответ: Проходить исследование следует в крупных и известных медицинских учреждениях. Как правило, они располагают наиболее современным и высокоточным оборудованием, качественными реактивами. Это повышает информативность теста и его точность. Кроме того, частные лаборатории обеспечивают пациентов расходниками, необходимыми для правильной доставки проб.
Вопрос: Сдавать мазок из уретры больно или нет? Все знакомые говорят по-разному.
Ответ: Ощущения сугубо субъективные. Как правило, женщины переносят процедуру легко. Мужчины испытывают дискомфорт, что спровоцировано анатомическими особенностями строения уретры. Задача лаборанта — не допустить попадание крови в образец, поэтому нужно быть готовым к незначительным и кратковременным неприятным ощущениям.
Вопрос: Сколько делается комплексный анализ ПЦР? Можно ли попросить сделать тест срочно?
Ответ: Продолжительность проведения анализа варьируется от 5 до 8 часов. Процесс обработки результатов может занять несколько больше времени. Рассчитывать на результат можно спустя 1‒2 суток. Крупные, оснащенные по последнему слову техники лаборатории могут предоставить протокол исследования через несколько часов. Вопрос срочности следует решать индивидуально.
Вопрос: Можно ли сдавать полимеразную цепную реакцию вместо пробы Манту? Например, собирая ребенка в детский сад?
Ответ: Возможность замены тестов следует обсуждать с руководством заведения. Некоторые детсады и школы действительно разрешают приносить результаты ПЦР на туберкулез родителям, которые не хотят делать своим детям Манту. Однако нужно учитывать, что достоверность анализа относительно микобактерий туберкулеза несколько снижена, что обусловлено различными концентрациями возбудителя в биологических средах организма. Чтобы получить точный результат, следует сдавать на ПЦР мазок из зева, мокроту либо мочу.
Вопрос: Почему ИФА показывает положительный результат, а ПЦР — отрицательный?
Ответ: Иммуноферментный анализ направлен на поиск в крови антител к специфическим антигенам инфекций. Метод отражает не только сам факт заражения, но и реакцию иммунитета на этот процесс. ПЦР ищет непосредственно возбудителя. ИФА будет положительным еще некоторое время после лечения антибиотиками, тогда как ПЦР покажет отсутствие инфекции в крови. Кроме того, на похожие антигены могут вырабатываться сходные антитела, что также обуславливает позитивный результат ИФА при негативном тесте ПЦР. Редко для дополнения теста ИФА приходится сдавать бакпосев.
ПЦР — универсальный, точный, специфичный и информативный способ диагностики инфекционных заболеваний. Его используют для раннего обнаружения опасных бактерий и вирусов в организме. Референтное значение результата анализа — «отрицательный» относительно всех искомых возбудителей. Тест назначают для идентификации провокатора заболевания и правильного подбора терапии. ПЦР применяется и в процессе лечения, для определения вирусной нагрузки.
Содержание статьи:
Высокоинформативный метод ПЦР (полимеразная цепная реакция) дает возможность раннего выявления различных генетических и инфекционных болезней, протекающих остро или хронически. Причем выявить их можно еще на том этапе, когда они не проявляют себя никакими симптомами. Чаще всего к анализу ПЦР прибегают для обнаружения инфекций передающихся половым путем (ЗППП, ИППП).
На следующем этапе диагностики результаты анализируются и сопоставляются с базой данных возбудителей инфекций. Методика ПЦР не просто дает возможность определить вид патогенного организма, но и позволяет сделать выводы о количестве возбудителей инфекции в человеческом организме. Сегодня применение подобных технологий открывает широкие возможности при исследовании мутаций, сращивания участков ДНК. В современной медицине метод начал применяться для определения отцовства, выявления новых генов и многого другого. Благодаря своей универсальности метод ПЦР нашел широкое применение в урологии, гинекологии, пульмонологии, онкологии, гематологии, фтизиатрии, практике инфекциониста и других областях медицины.
Подготовка к процедуре не связана особыми сложностями. Достаточно запомнить несколько правил:
- Кровь на анализ ПЦР сдается натощак. Кровь берут из вены обычно с утра стерильной иголкой в специальный контейнер. - В течение суток до забора материала показано половое воздержание при взятие мазка ПЦР на ИППП. - Для анализа мочи на ПЦР берется первая порция, емкость должна быть стерильной.Схема забора материала на ПЦР из носа
Схема забора материала на ПЦР с миндалин
Схема забора материала на ПЦР со слизистой глаз
Схема забора материала на ПЦР со слизистой щеки
Схема забора материала на ПЦР у женщин
Схема забора материала на ПЦР у мужчин
Для оценки эффективности методики есть три критерия:
- Точность – выявление инфекции (или ее отсутствия) с высокой степенью вероятности.
- Специфичность – точность определения конкретного возбудителя.
- Чувствительность – возможность идентификации возбудителя даже при малом количестве генетического материала в биологических образцах.
При использовании метода ПЦР получение ложноположительных результатов практически невозможно (то есть, если возбудитель отсутствует, то положительной проба не будет). Ложноотрицательный результат возможен, но такое происходит довольно редко. Подобные ситуации возникают, если инфекция на момент исследования неактивна. К примеру, хроническая инфекция вне активности или же латентная инфекция.Онлайн тесты на простатит, аденому, импотенцию: как ими пользоваться
Прохождение тестов онлайн на специализированных порталах никогда не заменит очную консультацию врача и полноценное обследование, но с помощью тестирования можно подтвердить, что проблема
Подробно Анализ ПЦР: расшифровка, как берут у мужчин и женщинВысокоинформативный метод ПЦР (полимеразная цепная реакция) дает возможность раннего выявления различных генетических и инфекционных болезней, протекающих остро или хронически. Причем
Подробно Анализ на ЗПППАнализы на инфекции, передаваемые половым путем (ЗППП, ИППП), являются необходимой диагностической процедурой для выявления венерических заболеваний, которые обязательно надо лечить
Подробно Анализ секрета простатыАнализ секрета простаты важный диагностический метод, который позволяет подтвердить такой диагноз, как простатит. В этой статье мы подробно расскажем как он проводится, какая подготовка
ПодробноСправочник
Клиники и врачи
В этой статье Вы узнаете, как берут ПЦР у женщин, как проводится подготовка к ПЦР женщине, и что такое ПЦР тестирование у женщин.
Вы узнаете, как берут кровь на ПЦР у женщин, и, на какие инфекции проверяют мазок.
ПЦР (полимеразная цепная реакция) у женщин позволяет выявить заболевания, передаваемые половым путем.
С целью обследования методом ПЦР берется мазок из влагалища, шейки матки и цервикального канала у женщин.
Также при необходимости исследуют мазок со слизистой ротовой полости, анального отверстия, мочу, кровь.
На какие инфекции смотрят кровь ПЦР у женщин
Что представляет собой ПЦР?
В специальный аппарат помещают биоматериал, а именно мазки со слизистых оболочек.
Добавляется фермент, который помогает синтезировать копию генетического материала микроорганизма (ДНК или РНК) в несколько этапов.
Результат сравнивают с так называемыми эталонами - существующей информацией о ДНК или РНК известных бактерий и вирусных частиц.
Мазок берет венеролог или врач-гинеколог, с помощью специального деревянного шпателя, из наружного отверстия уретры, шейки матки и влагалища.
Забор материала - процедура безболезненная и вполне безопасная, осуществляется с помощью стерильного одноразового материала.
Содержание:
ПЦР (полимеразная цепная реакция) – достижение молекулярной биологии, одна из главных методик клинической лабораторной диагностики конца 20-го и начала 21-го веков, приносящая огромную пользу в различных областях медицинской науки.
Многие люди путают ее с ИФА (иммуноферментный анализ), что, в общем-то, понятно. Они в чем-то схожи, поскольку выполняют одну задачу – поиск причины патологических состояний, обусловленных проникновением в организм человека инфекционных агентов. Однако между ними есть и различия. ИФА, например, ищет следы пребывания микроорганизмов, то есть, антитела (АТ), а ПЦР находит «святая святых» возбудителя – ДНК или РНК (нуклеиновые кислоты), дающих жизнь чуждым человеческому телу микроскопическим существам.
Методам ПЦР доступны нуклеиновые кислоты «врага», находящиеся во всех биологических жидкостях и тканях организма, поэтому данный анализ не обязывает использовать в качестве исследования только венозную кровь, можно взять слюну, выделения из половых путей, мокроту или другую среду, несущую информацию о заболевании. Выбор материала для исследования остается за врачом, который предполагает ту или иную патологию и знает, какая среда в таких случаях более информативна.
ПЦР-исследование – это достижение и огромная заслуга молекулярной биологии. Это – метод, который, обнаружив микроучастки ДНК или РНК чужеродного генетического материала (генома), способен распознать индивидуальные характеристики, присущие только одному виду микроорганизмов, не спутав его ни с каким другим. Как же работает метод ПЦР и как ему удается восстановить картину поведения инфекционной клетки в живом организме?
процесс проведения ПЦР
Итак, фрагмент нуклеиновой кислоты найден, но он один и для проведения реакции его явно недостаточно, поэтому он кодируется (копирование). Однако для дальнейшего процесса необходимо большое количество таких микроучастков, что может обеспечить его размножение путем достраивания новых, идентичных найденному фрагменту, участков ДНК (репликация). Размножение является естественным и неотъемлемым свойством нуклеиновой кислоты, которая будет реплицироваться с помощью фермента полимеразы даже вне живого организма (в пробирке с пробой), образуя множество клонов, то есть, пойдет цепная реакция. Клонироваться будут все новые и новые фрагменты, но только те, в которых заинтересован исследователь. Вот почему так важно взять «чистый», без посторонних примесей анализ, а тест проводить очень аккуратно.
Учитывая перечисленные способности полимеразной цепной реакции, можно догадаться, почему она так легко отличает уреаплазму от микоплазмы, или каждую из них от хламидии.
Таким образом, даже если среди миллионов клеток человеческого организма затеряется не сам живой вирус, а лишь частица его ДНК, то ПЦР, если ей ничто не помешает, пожалуй, справится с задачей и сообщит о пребывании «чужака» положительным результатом. В этом суть ПЦР и ее основное достоинство.
К лаборатории, осуществляющей ПЦР-диагностику, предъявляются высочайшие требования в плане оборудования, тест-систем и квалификации медицинского персонала. Это высокотехнологичная лаборатория, располагающая арсеналом высокочувствительных и высокоспецифичных реагентов, поэтому особых недостатков она не имеет. Разве что выдает положительный результат при отсутствии клинических проявлений и тем самым ставит лечебника перед дилеммой: стоит начинать лечение или нет?
Врач, наблюдающий пациента, начинает сомневаться в достоверности результатов тестирования, поскольку никаких признаков заболевания не видит. Но все же, учитывая высокую чувствительность ПЦР-системы, следует помнить, что она обнаруживает возбудителя даже в доклинической стадии, а положительный результат в таком случае является скорее достоинством, чем недостатком. Исходя из этого, лечащий врач должен сам принять решение о целесообразности терапии, взяв во внимание и другие аргументы «за» и «против».
Преимущества диагностики с помощью полимеразной цепной реакции очевидны:
Кроме этого, во избежание недоразумений, иной раз возникающих при диагностике, ПЦР защищает себя еще и тем, что ее результаты могут зафиксироваться (фотография, компьютер) с целью использования их в экспертных целях, если будет на то необходимость.
Нормой в ответах ПЦР считают отрицательный результат, указывающий на отсутствие фрагментов чужеродных нуклеиновых кислот, положительный ответ будет свидетельствовать о наличии инфекции в организме, цифровые значения означают состояние вируса и его концентрацию на момент тестирования. Однако полную расшифровку анализа осуществляет врач, прошедший специальную учебу по теме «ПЦР». Пытаться же интерпретировать результаты самостоятельно не имеет никакого смысла, поскольку можно, что скорее всего и произойдет, неправильно понять и начать заранее волноваться.
Как в любых других исследованиях, иной раз результаты теста оказываются ложноположительными или ложноотрицательными, где ПЦР исключением не является. Подобное может происходить в случаях:
Это говорит о том, что к ПЦР – диагностике инфекций нужно подходить внимательно, осторожно и аккуратно, иначе образцы материала могут поменять свое структурное строение или вовсе разрушиться.
Этапы ПЦР-диагностики. Ложные результаты могут дать нарушения на любом из этапов исследования
ПЦР-диагностика инфекций относится к категории «золотых стандартов» среди других лабораторных методов, поэтому ее можно применить для поиска возбудителей многих заболеваний, на первый взгляд не имеющих ничего общего между собой:
ПЦР-диагностика инфекций, передающихся половым путем, имеет особую значимость, поскольку заболевания, вызванные таким образом, часто длительное время протекают без каких бы то ни было клинических проявлений, зато при беременности начинают активизироваться и, таким образом, угрожать здоровью и даже жизни ребенка. Аналогично себя ведут и TORCH- инфекции. Некоторые из них («торч») относятся одновременно и к ИППП, поэтому последние требуют более подробного рассмотрения. Ознакомиться с самыми популярными методиками читатель сможет в следующих разделах статьи.
Сразу заметим, что подготовка к ПЦР довольно простая, никаких особых усилий со стороны пациента не требующая. Нужно лишь выполнить три несложных задания:
Метод ПЦР не отличается «кровожадностью», поэтому приемлет любую биологическую среду, содержащую предполагаемый инфекционный агент.Обычно выбор – что нужно взять для исследования, остается за врачом.
Таким образом, в поисках возбудителя, кроме анализа крови (хотя он тоже подходит и в большинстве случаях берется параллельно другому материалу), можно использовать:
К вышеперечисленному хочется добавить, что материала для тестирования во всех случаях, даже в соскобах и выделениях, будет достаточно, так как тестирование методом ПЦР больших объемов не требует, анализу хватает и нескольких микролитров, которые обычно берут в микропробирку типа «эппендорф» и отправляют на исследование.
Обычно при прохождении анонимного обследования в случае положительных результатов иммуноблотинга, диагностику ВИЧ-инфекции повторяют заново. Если диагноз подтверждается, пациенту назначают дополнительные исследования:
Методом ПЦР можно выявлять возбудителей гепатитов, чаще всего тест используется для диагностики С гепатита, который плохо определяется другими методами.
Вирус гепатита С (РНК-содержащий) по своему поведению в организме человека напоминает ВИЧ. Вклиниваясь в геном клеток печени (гепатоцитов), он пребывает там в ожидании своего часа, который может наступить хоть через 2 года, хоть через 20 лет, поэтому медики прозвали его «ласковым убийцей». Гепатит С приводит к формированию злокачественного процесса в печеночной паренхиме, который проявляется на поздних стадиях. Все эти события иммунная система не замечает, принимая вирус за гепатоцит. Правда, антитела к вирусу в некоторых количествах вырабатываются, однако они не обеспечивают достойный иммунный ответ. Для диагностики ИФА на гепатит С не очень информативен, поскольку указывает на то, что вирус оставил следы, а ушел ли сам – неизвестно. При ВГС известны случаи самоизлечения, в то время как антитела против вируса остаются и продолжают циркулировать пожизненно (иммунологическая память). ПЦР заметно опережает образование антител и может выявить вирусную частицу уже через 1-1,5 недели, в то время как АТ могут появиться в интервале от 2 месяцев до полугода
ПЦР-диагностика в случае подозрения на разгул вируса гепатита С в организме человека является наиболее оптимальным методом исследования, ибо только она способна распознать присутствие «ласкового врага» в крови или биоптате печени пациента.
Однако иной раз имеют место случаи, когда АТ положительны, а результат ПЦР – отрицательный. Такое иногда происходит при очень низком количестве вируса или при его «дремлющем» состоянии в печени без выхода в кровяное русло. Чтобы все-таки найти истину, у пациента берут повторный анализ, а то и не один.
ВПЧ (вирус папилломы человека), если не произойдет самоизлечение, тоже может, ничем себя не проявляя, долго персистировать в организме хозяина, который об этом даже не подозревает, поскольку ПЦР сделать не доводилось, а симптомы болезни отсутствовали. Однако наличие папилломовирусной инфекции, пусть и латентной, далеко не безразлично для здоровья человека, где особую опасность несут определенные типы вируса, вызывающие онкологические заболевания (типы 16, 18).
Чаще от ВПЧ страдает женская половина населения, так как вирус больше любит женскую половую сферу, а особенно – шейку матки, где некоторые типы вирусов способствуют развитию диспластических процессов, а затем и рака шейки матки, если не лечить дисплазию и дать волю вирусу. Так вот, полимеразная цепная реакция обнаружит вирусную ДНК, а затем укажет «плохой» или «хороший» (онкогенный или неонкогенный) тип поселился в организме женщины.
Очевидно, что полимеразная цепная реакция может найти любую чужеродную структуру, состоящую из нуклеиновых кислот, поэтому данный тест подходит для выявления всех ЗППП и TORCH-инфекций, тем не менее, он далеко не всегда используется. Зачем, скажем, проводить такие дорогие исследования для обнаружения трихомонады или гонококка, если есть более доступные и дешевые?
TORCH-инфекции и ИППП настолько взаимосвязаны, что, порой, трудно определить, к какой группе следует отнести тот или иной возбудитель. В них вообще бывает сложно разобраться, так как это довольно разнообразные группы микроорганизмов, которые могут передаваться половым путем всегда или только при определенных условиях (иммунодефицит), а могут представлять интерес лишь при беременности, ввиду возможного негативного влияния на ее течение и на плод.
В основе развития клинических проявлений лежат разные возбудители, найти которые бывает под силу только ПЦР, что и является ее основной задачей иногда совместно с ИФА, а иногда в качестве единственного подтверждающего теста, особенно, если симптоматика заболевания отсутствует. Такую непростую ситуацию может создавать полимикробная инфекция, которая, помимо явных возбудителей, включает еще и условно-патогенные.
У мужчин, страдающих воспалительными заболеваниями половой сферы, например, уретритом, часто выявляют хламидию, уреаплазму и микоплазму. Эти же виды несут опасность и женскому организму. Те, кто знает коварство хламидии и сталкивался с ней, наверняка помнят, как тяжело бывает ее найти и распознать, поэтому анализу, произведенному методом ПЦР на хламидии, особенно доверяют, ведь спрятавшийся в клетке очень маленьких размеров паразит ведет себя осторожно, а вред наносит всегда исподтишка.
Уреаплазма зачастую рассматривается в паре с микоплазмой. И это неспроста. Данные виды, как и хламидию, не относят ни к вирусам, ни к бактериям, они проживают внутри клеток и относятся к ИППП, хотя их присутствие в здоровом организме тоже далеко не редкость. Так вот, чтобы отличить здорового носителя от больного человека, нужны особые методы, где ПЦР считается наиболее надежным, поскольку, ввиду особенностей строения и поведения этих микроорганизмов, другие исследования оказываются неэффективными.
Что касается вируса герпеса (тип 1, 2) и цитомегаловируса, который тоже относится к герпесвирусам (тип 5), то здесь тоже ситуация неоднозначная. Инфицированность населения земного шара приближается к 100%, поэтому в данном случае очень важна идентификация вируса и его доза, что особенно играет роль при беременности, ведь взрослому человеку, вирус, прижившийся в его организме, часто не доставляет никаких хлопот и признаков заболевания не дает.
Поэтому не следует игнорировать назначенное врачом подобное обследование, ведь в некоторых случаях полимеразная цепная реакция является обязательным и необходимым методом лабораторной диагностики, способным защитить от серьезных осложнений не только женщину, но и маленького, еще не родившегося, человечка.
В заключение хочется отметить, что такой замечательный метод, как ПЦР, вот уже более 30 лет служит человечеству. При этом, задачи теста не ограничиваются поиском возбудителей инфекционных заболеваний. Полимеразная цепная реакция, рожденная на почве молекулярной биологии, неразрывно связана с генетикой, она успешно применяется в криминалистике для идентификации личности, в судебной медицине для установления отцовства, в ветеринарии, если клиника для животных имеет возможности приобретать дорогое оборудование, а также в других сферах (промышленность, сельское хозяйство и пр.).