Домой Регистрация
Приветствуем вас, Гость



Форма входа

Население


Вступайте в нашу группу Вконтакте! :)




ПОИСК


Опросник
Используете ли вы афоризмы и цитаты в своей речи?
Проголосовало 514 человек


Антинуклеарные антитела что это такое


Анализ на антинуклеарные антитела: причины повышения, коррекция

Свечение антител в микроскопе

Антинуклеарные антитела — это патологические компоненты иммунной системы, ведущие к возникновению аутоиммунных заболеваний соединительной ткани, таких как системная красная волчанка, синдром и болезнь Шегрена, системная склеродермия.

Антинуклеарные антитела представляют из себя белки-иммуноглобулины, вырабатываемые защитными клетками человеческого тела (лимфоцитами). Из-за сбоя в работе иммунной системы ядра собственных клеток распознаются ею как чужеродные и вредные, что приводит к ошибочной выработке антител к разным компонентам клеточных ядер.

Всего выявлено более 190 компонентов ядра, к которым может вырабатываться патологический иммунный ответ, однако диагностическое значение имеют около 20 из них. К наиболее важным относят антитела к одно- и двуспиральной ДНК, гистонам, нуклеосомам и рибосомальному P-протеину.

Ядро содержится практически в любой клетке человеческого тела, за исключением некоторых кровяных. Оно находится внутри клетки и защищено собственной оболочкой, цитозолем и внешней клеточной мембраной. Антитела находятся во внеклеточной среде и чаще всего не могут напрямую контактировать с ядром, повреждая его. Однако при любом нарушении целостности клеточных оболочек антинуклеарные антитела, если они имеются в организме, способны связываться с компонентами ядра, образуя нерастворимые комплексы. Именно они и являются причиной возникновения разнообразных аутоиммунных заболеваний соединительной ткани.

Механизм образования

Антинуклеарные антитела и рецепторы

В норме собственные клетки организма даже в разрушенном состоянии иммунного ответа не вызывают. Однако сбои в работе иммунной системы наблюдаются постоянно даже у здоровых лиц, и при неблагоприятном стечении обстоятельств иммунитет может сформироваться на любой из компонентов клетки. В организме предусмотрена своеобразная система «отбраковки» патологических антител, в большинстве случаев она срабатывает, антитела уничтожаются, не вызывая болезнь.

Однако в некоторых случаях антинуклеарные антитела возникают в больших количествах и оказываются вовремя не распознаны организмом как патологические. Чаще всего это бывает при обширных солнечных ожогах, когда миллионы клеток кожи оказываются повреждены ультрафиолетом. Ядра погибших клеток оказываются непосредственно во внутренней межклеточной среде организма, где их встречают иммунные клетки — лимфоциты и макрофаги.

ДНК из ядер, гистоновые белки и другие белковые и нуклеиновые компоненты могут быть настолько повреждены ультрафиолетовым излучением, что в некоторых случаях изменяются до неузнаваемости. Именно это и провоцирует иммунные клетки вырабатывать против них антитела, как против чужеродных веществ.

Нормальные значения АНА

Отсутствие антител — вариант нормы

Нормальным значением является полное отсутствие антинуклеарных антител. При скрининговом ИФА-исследовании отрицательный ответ чаще всего записывается с указанием титра (разведения), пример: «Отрицательно, < 1:160». При развернутом иммуноблот-исследовании на антитела к разным компонентам ядра клетки, ответ зачастую записывается для каждого вида антител по отдельности. Например: «АТ к двуспиральной ДНК — отрицательно; АТ к PCNA — отрицательно; АТ к Scl-70 – отрицательно».

Иногда у здоровых лиц обнаруживаются AHA в небольших количествах (слабоположительный результат), что может свидетельствовать о генетической предрасположенности к аутоиммунным заболеваниям. Результат анализа «Сомнительно» может быть вызван наличием антител в очень низкой концентрации, которая находится около пороговых значений чувствительности медицинской тест-системы для анализа. Чаще всего после получения результата «Сомнительно» анализ рекомендуется повторить через 4-5 недель.

Причины повышения ANA

Повышение антител при системной склеродермии

Положительный результат анализа может свидетельствовать о наличии одного или нескольких следующих заболеваний:

Гепатит может стать причиной слабоположительного результата

Слабоположительный результат может быть вызван как наличием вышеперечисленных заболеваний, так и заболеваниями, не связанными с системой иммунитета. Перечислим основные болезни, которые могут его вызвать:

Слабоположительный результат анализа иногда выявляется у здоровых лиц, чаще у женщин в возрасте старше 60 лет.

Показания к исследованию

Показанием для проведения анализа могут быть боли в суставах

Исследование показано при симптомах, не исключающих аутоиммунную патологию соединительной ткани:

Также анализ назначается при имеющемся аутоиммунном заболевании для контроля за эффективностью лекарственной терапии.

Подготовка к анализу и методика проведения исследования

Определение антител может быть выполнено в нескольких вариантах

Анализ сдается утром натощак либо в другое время, однако не ранее 5-6 часов после последнего приема пищи. Также желательно не принимать никакие лекарственные средства до взятия крови на исследование.

Существует несколько вариантов проведения анализа, отличающихся по своей точности и возможности количественной оценки концентрации антител.

Скрининговое ИФА-исследование (иммуноферментный анализ) позволяет выявить наличие суммарных антинуклеарных антител и их титра. К плюсам метода относится его относительная дешевизна и возможность выяснить, необходимы ли расширенные исследования. При отрицательном результате анализа дальнейшие исследования чаще не показаны.

Непрямая флуоресцентная микроскопия — это метод, основанный на окрашивании антител специальными веществами, дающими под ультрафиолетовым светом зеленое свечение. Тип и характер свечения позволяет врачу лабораторной диагностики определить, с какими компонентами клетки связались антитела, а также примерно узнать их количество.

Иммуноблот-исследование позволяет определить наличие каждого типа антинуклеарных антител по отдельности. Чаще всего этот анализ назначается после положительного результата другого исследования для уточнения диагноза.

Факторы, влияющие на результат

Лекарственные препараты способны искажать результат

Ложноположительный результат анализа может быть вызван приемом некоторых групп лекарственных препаратов:

Прием лекарственных средств желательно ограничить за 1-2 дня до анализа в строгом соответствии с рекомендациями лечащего врача.

Лечение отклонений от нормы

Диагноз и лечение определяет врач

Для лечения аутоиммунных заболеваний соединительной ткани применяются следующие группы препаратов:

Стоит заметить, что диагностика данной группы заболеваний сложна и требует ряда дополнительных исследований, кроме выявления антинуклеарных антител и их вида. Диагноз чаще всего не может быть установлен после однократного исследования крови.

Поделиться:

Антинуклеарные антитела (ANA)

Антинуклеарные антитела (ANA, АНА) – специфические иммуноглобулины, связывающиеся с компонентами клеточных ядер собственного организма. Определяются в плазме при ревматических болезнях, первичном билиарном циррозе, злокачественных опухолях, инфекциях. Исследование применяется для диагностики и дифференциации аутоиммунных заболеваний в рамках скрининга и при характерных клинических признаках. Забор крови производится из вены. Анализ выполняется тремя способами: иммуноферментным методом (определяется общий уровень ANA), методом иммуноблоттинга и реакции непрямой иммунофлуоресценции (выявляется до 15 разновидностей ANA). В норме результат отрицательный. Срок проведения теста при ИФА – 1 день, при иммуноблоттинге, РНИФ – 8 дней.

Антинуклеарные антитела (ANA, АНА) – специфические иммуноглобулины, связывающиеся с компонентами клеточных ядер собственного организма. Определяются в плазме при ревматических болезнях, первичном билиарном циррозе, злокачественных опухолях, инфекциях. Исследование применяется для диагностики и дифференциации аутоиммунных заболеваний в рамках скрининга и при характерных клинических признаках. Забор крови производится из вены. Анализ выполняется тремя способами: иммуноферментным методом (определяется общий уровень ANA), методом иммуноблоттинга и реакции непрямой иммунофлуоресценции (выявляется до 15 разновидностей ANA). В норме результат отрицательный. Срок проведения теста при ИФА – 1 день, при иммуноблоттинге, РНИФ – 8 дней.

В норме погибшие клетки организма фагоцитируются макрофагами. При аутоиммунном заболевании происходит не только утилизация клеточных компонентов (ядрышек, гистонов, оболочек ядер), но и передача информации о них в рамках иммунного ответа. B-лимфоциты запускают выработку антител к ядерным антигенам. Образующиеся иммунные комплексы закрепляются на базальных мембранах сосудов и органов, активируется система комплемента, развивается местное воспаление. Исследование ANA с помощью иммуноферментного анализа обладает невысокой специфичностью, но экономично по времени и трудовым затратам. Иммуноблоттинг и метод РНИФ дают высокоспецифичную информацию, но их распространение ограничивается трудоемкостью и высокой стоимостью процедуры.

Показания

Тест на антинуклеарные антитела назначается при аутоиммунных патологиях. Показания к суммарному определению IgG, IgM, IgA с помощью ИФА:

Определение антинуклеарных антител методами иммуноблоттинга и РНИФ используется более узконаправленно. Показания:

Подготовка к анализу

Уровень АНА определяется в венозной крови. Ее забор выполняется утром, специальной подготовки не требуется, но стоит придерживаться общих правил:

  1. Выдержать период голода 4-6 часов. Пить воду разрешено без ограничений.
  2. Ограничить употребление жирной пищи накануне вечером, в течение дня отказаться от приема алкогольных напитков, выполнения интенсивных физических нагрузок. Избегать влияния стрессовых факторов.
  3. За 7-10 дней сообщить врачу об используемых лекарствах. Их действие будет учтено при интерпретации результата.
  4. Физиотерапевтические процедуры, инструментальные обследования выполнять после сдачи крови.
  5. За 30 минут воздержаться от курения, умеренных физических нагрузок.

Кровь забирается из локтевой вены, доставляется в лабораторию в герметичной пробирке. Предварительно из первичного биоматериала выделяют сыворотку. При определении общего количества антинуклеарных антител выполняется иммуноферментный анализ, при исследовании их разновидностей – иммуноблоттинг, реакция непрямой иммунофлуоресценции. В первом случае результат подготавливается за 1 день, во втором – за 8 дней.

Нормальные значения

В норме АНА в плазме отсутствуют или определяются в небольшом количестве, не влияя на функционирование тканей. Отрицательный результат выражается по-разному в зависимости от способа выполнения теста:

На итоговый показатель не влияют физиологические факторы. Нормальный результат не исключает заболевание, но снижает вероятность патологии.

Повышение показателя

Интерпретация повышенного показателя теста зависит от метода исследования. При определении уровня суммарных ANA причиной увеличения их концентрации являются:

При анализе с определением вида антинуклеарных антител интерпретируется повышение отдельных показателей. При иммуноблоттинге выполняется разделение видов АТ. При РНИФ преобладающие АТ выявляются по характеру свечения. Причинами отклонения результатов от нормы могут быть СКВ, синдром Шарпа, синдром Шегрена, склеродермия, ревматоидный артрит, неонатальный волчаночноподобный синдром, полимиозит, изолированный синдром Рейно, волчаночный нефрит, CREST-синдром, полимиозит, дерматомиозит, лекарственная волчанка, билиарный цирроз.

Лечение отклонений от нормы

Анализ на антинуклеарные антитела широко распространен в клинической практике как инструмент для скрининга, дифференциальной диагностики и мониторинга аутоиммунных патологий. Способы выявления АНА адаптируют исследование под разные задачи. За интерпретацией результата и назначением лечения нужно обратиться к врачу – ревматологу, дерматовенерологу, нефрологу.

Источник

Антинуклеарные антитела (АНА)(колич.) (в крови) - Забор анализов на дому – 755-9395 - Столица-Медикл

Антинуклеарные антитела (АНА, антиядерные антитела, антинуклеарный фактор) - показатель системных заболеваний соединительной ткани. Представляет собой группу аутоантител к белкам и другим компонентам, находящимся в ядрах клеток. Основные показания к применению: исключение диагноза - системная красная волчанка (считается , что АНА появляются в 90% случаев СКВ), дифференциальная диагностика системных коллагенозов (системная красная волчанка, склеродермия, узелковый периартериит, дерматомиозит), хронический активный гепатит.

При некоторых заболеваниях, например СКВ, системной склеродермии (системный склероз), некоторых инфекциях, иммунная система пациентов воспринимает ядра (белки ядер) клеток собственных тканей, как чужие, и продуцирует к ним антитела (антинуклеарные антитела - AHA). При этом они повреждают соединительную ткань, что и способствовало внедрению определения антинуклеарного фактора в качестве теста на системные заболевания соединительной ткани.

При интерпретации данных следует учитывать, что спектр AHA включает в себя большую группу аутоантител к ДНК, нуклеопротеидам, гистонам, ядерным рибонуклеопротеидам и другим компонентам ядра. К настоящему времени описано более 200 разновидностей АНА, направленных против нуклеиновых кислот, гистонов, белков ядерной мембраны, компонентов сплайсосомы, рибонуклеоротеинов, белков ядрышек и центромер. Таким образом тест направлен на обнаружение различных антител к компонентам ядра и цитоплазмы, которые впервые были обнаружены при СКВ. В дальнейшем диагностические критерии теста были расширены в связи с обнаружением данных антител и при других заболевания соединительной ткани.

В скрининговых тестах для определения суммарных АНА обычно используется набор следующих антигенов, являющихся основными маркерами аутоиммунных заболеваний соединительной ткани: SS-A (Ro), SS-B (La), Scl-70, Sm, RNP/Sm, J01, центромере B. Основные антигены, применяющиеся в современных наборах для выявления ядерных антител класса IgG представлены следующим набором:

  1. SS-A (Ro) - ядерные рибонуклеопротеины, (полипептиды). Антитела на них обнаруживаются, чаще, при системной склеродермии (60 % случаев), синдроме Шегрена (до 70% случаев) и при СКВ (до 30% случаев). Считается, что если данные антитела обнаруживаются в крови у беременных, то это является показателем риска увеличения возникновения неонатального волчаночноподобного синдрома у новорожденного ребенка (неонатальный люпус-синдром). Данные антитела матери проходят через плаценту и вызывают поражение плода, приводящие к гемолитической анемии и тромбоцитопении. К тяжелым последствиям относят поражение проводящей системы сердца ребенка (вплоть до постоянной кардиостимуляции). Отмечено, что у женщин у которых во время беременности был выявлен значительный титр данных антител, без явных клинических признаков, в дальнейшем развивается какое либо аутоиммунное заболевание, включая СКВ.
  2. SS-B (La) - ядерные белки. Антитела к ним выявляются до60% случаев при синдроме Шегрена и в 15% случаев при СКВ.
  3. Scl-70 - белок-фермент, участвующий в обмене нуклеиновых кислот (топоизомераза-1). Антитела на данный белок наиболее специфичны при системной склеродермии (до 70% случаев).
  4. Двухцепочечная ДНК - нативная ДНК. Антитела к ДНК наиболее специфичны при СКВ (до 80% случаев) и практически не определяются при ревматоидном артрите и склеродермии.
  5. RNP/Sm - Комплекс антигенов RNP/Sm состоит из U1-рибонуклеопротеидов: U1-68, U1-A, U1-C, U5, U6; а также из Sm-полипептидов: SmA | , SmB | B, SmD, SmE, SmF, SmG. Антитела, образующиеся к этим антигенам наиболее специфичны для смешанных заболеваний соединительной ткани - т.е. при наличии симптомов склеродермии, ревматоидного артрита, СКВ, полимиозита (около 95% случаев) и в меньшей степени для СКВ (до 30% случаев).
  6. Jo-1 - фермент - синтетаза аминоацилтранспортной РНК. Аутоантитела к данному белку являются диагностически значимыми при миозите (полимиозит/дерматомиозит).
  7. CENP-B (Центромера) - для выявления Антицетромерных антител (Anti-Centromer B), с целью диагностики CREST-синдрома (данный синдром представляет собой совокупность кальциноза кожи, синдрома Рейно, нарушения моторики пищевода, склеродактилии, телеангиэктазии. CREST-синдром относится к варианту системной склеродермии (системный склероз). Данные антитела у больных свидетельствуют о благоприятном течении системной склеродермии и говорят о небольшом поражении внутренних органов.
  8. Hep-2 клетки - клетки эпителиальной карциномы гортани человека линии Hep-2, содержащие много различных ядерных антигенов, включая антиген SS-A (Ro) и антигены центромеры. Антитела к Hep-2 обнаруживаются у больных с полимиозитом и дерматомиозитом до 90% случаев.
  9. Митохондрии (PDC). PDC - пируватдегидрогеназный комплекс. Большая группа антимитохондриальных антител представляют собой аутоантитела, которые образовались на ферменты пируватдегидрогеназного комплекса, располагающегося в митохондриях клеток и участвующего в окислительном декарбоксилировании пирувата.

Часто эти антитела обнаруживаются при билиарном циррозе печени.

AHA обычно не проникают в живые клетки и поэтому безвредны. Но иногда они образуют комплексы антиген-антитело, которые вызывают повреждение ткани (как, например, при СКВ поражение почек). В связи с вовлечением в патологический процесс многих органов диагностическое значение определения AHA невелико и результаты анализа лишь частично подтверждают клинические данные.

Помимо ревматических заболеваний, АНА обнаруживаются и при хроническом активном гепатите до 50% случаев.

Антинуклеарные антитела

  • Заболевания сердца, сосудов и крови Заболевания сердца, сосудов и крови Заболевания сердца, сосудов и крови Заболевания органов пищеварения Заболевания сердца, сосудов и крови Аллергии и аутоиммунные заболевания Аллергии и аутоиммунные заболевания Аллергии и аутоиммунные заболевания Аллергии и аутоиммунные заболевания Аллергии и аутоиммунные заболевания Аллергии и аутоиммунные заболевания Аллергии и аутоиммунные заболевания Аллергии и аутоиммунные заболевания Врожденные и обменные заболевания Врожденные и обменные заболевания Врожденные и обменные заболевания Врожденные и обменные заболевания Врожденные и обменные заболевания Врожденные и обменные заболевания Врожденные и обменные заболевания Врожденные и обменные заболевания Заболевания костей, мышц и суставов Заболевания костей, мышц и суставов Заболевания костей, мышц и суставов Заболевания костей, мышц и суставов Заболевания костей, мышц и суставов Заболевания костей, мышц и суставов Заболевания костей, мышц и суставов Заболевания костей, мышц и суставов Заболевания мочеполовой системы Заболевания мочеполовой системы Заболевания мочеполовой системы Заболевания мочеполовой системы Заболевания мочеполовой системы Заболевания мочеполовой системы Заболевания мочеполовой системы Заболевания мочеполовой системы Заболевания нервной системы Заболевания нервной системы Заболевания нервной системы Заболевания нервной системы Заболевания нервной системы Заболевания нервной системы Заболевания нервной системы Заболевания нервной системы Заболевания органов дыхания Заболевания органов дыхания Заболевания органов дыхания Заболевания органов дыхания Заболевания органов дыхания Заболевания органов дыхания Заболевания органов дыхания Заболевания органов дыхания Заболевания органов пищеварения Заболевания органов пищеварения Заболевания органов пищеварения Заболевания органов пищеварения Заболевания органов пищеварения Заболевания органов пищеварения Заболевания органов пищеварения Заболевания органов пищеварения Заболевания сердца, сосудов и крови Заболевания сердца, сосудов и крови Заболевания сердца, сосудов и крови Заболевания сердца, сосудов и крови Заболевания сердца, сосудов и крови Заболевания сердца, сосудов и крови Заболевания сердца, сосудов и крови Заболевания сердца, сосудов и крови Заболевания эндокринной системы Заболевания эндокринной системы Заболевания эндокринной системы Заболевания эндокринной системы Заболевания эндокринной системы Заболевания эндокринной системы Заболевания эндокринной системы Заболевания эндокринной системы Ревматические и системные заболевания Ревматические и системные заболевания Ревматические и системные заболевания Ревматические и системные заболевания Ревматические и системные заболевания Ревматические и системные заболевания Ревматические и системные заболевания Ревматические и системные заболевания
  • Антинуклеарные антитела (АНФ).

    Пт, 01/11/2019 - 21:27 / nazarov

    Лабораторное исследование антинуклеарных антител.

    Основной задачей лабораторного тестирования антинуклеарных антител (АНА) является определение всех разновидностей аутоантител, присутствующих в конкретном образце. Методы выявления АНА делят на скрининговые, которые детектируют присутствие или отсутствие АНА в образце, и подтверждающие, результатом которых является определение спектра специфичностей АНА. Скрининговые тесты для выявления АНА используют для ранней диагностики системных заболеваний соединительной ткани (СЗСТ), а также исключения диагноза СЗСТ в случае неопределенной клинической картины. В тестировании АНА особое значение имеет метод непрямой иммунофлюоресценции (антинуклеарный фактор), в котором антитела выявляются за счет связывания с антигенами внутри клеток или тканевого субстрата. Термин антинуклеарный фактор (АНФ) обобщает тесты для скринигового выявления АНА, основанные на методе непрямой иммунофлюоресценции. Антитела выявляются за счет их связывания с клетками клеточных линий (реже криосрезами тканей лабораторных животных). Исторически использовался ряд клеточных и тканевых субстратов для выявления АНФ, но в настоящее время, повсеместно используется клеточная линия эпителиоидных клеток аденокарциномы гортани человека НЕр2. Распределение антигенов внутри клетки определяет тип свечения ядра, который позволяет судить о спектре АНА, присутствующих в данной сыворотке. Не всегда при наличии даже высоких тиров АНФ можно установить антигенную специфичность АНА, поскольку многие антигены, выявляющиеся с помощью АНФ, относят к конформационным (т. е. нестойким) и до сих пор плохо охарактеризованы. На отечественном рынке реактивы для определения АНФ представлены рядом производителей, например Euroimmun AG (Германия), Immco (США), BioSystems, (Испания), Medipan AG (Германия). Преимуществами продукции Euroimmun AG является использование клеточной линии Нер-2000, обладающей повышенным числом клеточных делений, а также возможность совместного иммунофлюоресцентного исследования в одном реакционном поле других субстратов, например печени приматов, что повышает выявляемость ряда специфичностей АНА. Кроме АНФ применяют скрининговые тесты, основанные на выявлении антител к смеси антигенов ядер, очищенных из клеток или полученных методами генной инженерии. До недавнего времени для описания спектра АНА в иммунологических лабораториях, использовался экстрагируемый ядерный антиген (ЭНА), представляющий водно-солевые экстракты ядер клеток. В состав ЭНА входят растворимые клеточные антигены, прежде всего рибонуклеопротеины, однако водонерастворимые антигены, например нуклеиновые кислоты, в составе ЭНА отсутствуют. В настоящее время, под названием антитела к ЭНА обычно подразумевают выявление антител к смеси рекомбинантных антигенов. Проведение дифференциальной диагностики в рамках СЗСТ требует определения отдельных специфичностей АНА. Для определения специфичностей АНА существует широкий спектр методов и принципов детекции аутоантител, причем этот перечень постоянно расширяется. Современные молекулярно-биологические методы позволяют получать большой набор очищенных аутоантигенов, что значительно облегчает разработку новых тестов. Ведущими мировыми производителями создаются автоматизированные полузакрытые и закрытые системы, основанные на различных принципах: методе ИФА, дот- и лайн-блоты, хемилюминесцентный метод, мультиплексный анализ на микрочастицах и др. (таблица 1).

     Несмотря на совершенствование методов, лайн-блоты представляют собой сравнительно дешевую, но достаточную надежную альтернативу автоматизированным технологиям для лабораторий с небольшим потоком исследований. Большинство лайнблотов, представленных на отечественном рынке, позволяет выявлять от 9 до 20 различных аутоантител в одном тесте, что обеспечивает значительное преимущество перед другими технологиями по спектру определяемых показателей. Так для диагностики СЗСТ фирма Euroimmun AG (Германия), выпускает линейку иммуноблотов с возможностью выявления до 30 специфичностей АНА. Разработаны продукты как для дифференциальной диагностики всех СЗСТ, так и для дифференциальной диагностики в рамках системной красной волчанки (СКВ), склеродермии, полимиозита. Возможность денситометрии с помощью оптических систем ряда офисных сканеров обеспечивает возможность количественной и полуколичественной оценки результатов блотов, а также возможность архивации результатов исследований (программа EUROLineScan). Внедрение современных автоматизированных систем ставит вопрос о целесообразности сохранения АНФ в качестве основного метода диагностики АНА. Несмотря на большую аналитическую чувствительность иммунометрических методов по сравнению с непрямой иммунофлюоресценцией на тканевых субстратах, спектр выявляемых АНА с помощью таких методов ограничен. Ограниченный спектр выявляемых специфичностей АНА обуславливает меньшую диагностическую чувствительность иммунометрических мультиплексных тестов по сравнению с АНФ, т. е. при использовании таких методов высока вероятность ложно-отрицательного результата. Наши данные свидетельствуют о том, что при определении АНА, например с помощью лайнблота, теряется до 9% и 50% положительных результатов в высоких и средних титрах АНФ соответственно. Именно поэтому АНФ до сих пор является «золотым стандартом», использование которого обеспечивает наиболее корректные результаты при выявлении АНА.  

    Международные рекомендации 2014 года

    Для исследования АНА в клинической лаборатории может быть использовано множество диагностических тестов, основанных на разных принципах. Единой номенклатуры этих тестов не существует, что приводит к определенным затруднениям при назначении и интерпретации обследования. Фирмы-производители реактивов и оборудования для клинической лабораторной диагностики могут предлагать различные методические подходы к скринингу АНА и определения основных специфичностей. При этом выявление АНА постепенно покидает стены высокоспециализированных иммунологических лабораторий, что может привести к снижению качества обследования в угоду большей технологичности и пропускной способности метода. Несмотря на важность выявления АНА, до недавнего времени не существовало международных рекомендаций, регламентирующих методы выявления АНА в клинической лабораторной диагностике. Международные рекомендации по выявлению АНА были опубликованы недавно. В их подготовке принимали участие две группы экспертов. Наиболее многочисленной действующей группой, которая включала экспертов из 15 Европейских стран, является «Европейская аутоиммунная инициатива по стандартизации» (European Autoimmunity Standardization Initiative — EASI). Под ее эгидой проводится значительное количество конференций и круглых столов по вопросам диагностики аутоиммунных заболеваний (www.easinetwork.com). Другой международной организацией является совместный комитет Международного союза иммунологических обществ (IUIS), Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ/WHO), Фонда артрита (AR), Центра по контролю и предотвращению заболеваемости США (CDC) и Американского колледжа ревматологов (ACR). «Совместный комитет по стандартизации аутоантител при ревматических и близких заболеваниях» (IUIS/WHO/ AR/CDC) более тридцати лет разрабатывает и внедряет стандарты и референтные сыворотки для выявления аутоантител (www.autoab.org). Опубликованные международные методические рекомендации охватывают основные методические вопросы организации лабораторного выявления АНА (таблица 2). 

    Данные методические рекомендации разделены на 3 блока вопросов. Первые 13 рекомендаций касаются методов выявления АНФ и регламентируют его использование, следующие 5 затрагивают выявление антител к двуспиральной ДНК и, наконец, последние пять пунктов определяют подходы к выявлению антител к ЭНА и специфичностей АНА. Рекомендации подчеркивают важность АНФ как референтного теста для скринингового выявления АНА, а также указывают на важность определения типа свечения ядра клетки.

    Тип свечения клетки позволяет планировать дальнейшее тестирование, например классический гомогенный тип может быть поводом для выявления антител к двуспиральной ДНК, центромерный тип — для исследования АНА характерных для склеродермии, а гранулярный цитоплазматический тип свечения обычно указывает на наличие антимитохондриальных антител, характерных для первичного билиарного цирроза.

    Лабораторные алгоритмы диагностики СЗСТ.

    Учитывая разнообразие методов выявление АНА, одновременное назначение всех скрининговых и подтверждающих методов является трудоемким, дорогостоящим и часто неоправданным. Очевидно, что возникает необходимость последовательного тестирования данных АНА, основанном на определенном диагностическом алгоритме. Так как общепринятого алгоритма серологической диагностики АНА у лиц с подозрением на СЗСТ не существует, ряд авторов рекомендуют использовать внутренние алгоритмы, оптимизирующие выявление АНА в рутинной работе. Нами было проведено исследование по разработке и практической оценке алгоритма для диагностики СЗСТ, основанного на результатах обследования 981 пациента в нашей лаборатории. Для выявления АНФ нами был использован метод непрямой иммунофлюоресценции на клеточной линии НЕр-2 и Нер2000 (Euroimmun AG, Германия). Клеточная линия Нер-2000 обладает повышенной частотой клеточных делений, и клетки делятся в 4–10 раз чаще по сравнению с классической линией Нер-2. Для определения АНА с помощью лайнблота использовались диагностические наборы фирмы «Euroimmun AG» (Германия). Данная диагностическая система содержит следующие рекомбинантные антигены: Sm, RNP/Sm, SS-A, SS-B, Scl-70, CENP-B, PCNA, дсДНК, нуклеосомы, гистоны, Jo-1, АМА-М2. Среди исследованных 981 образцов сыворотки крови лиц с подозрением на СЗСТ в 474 образце были выявлены АНА. В данных образцах анализировались результаты выявления АНФ и антител к ЭНА. Хотя оба метода обладают высокой сходимостью, чувствительность определения антител к ЭНА значительно уступает АНФ (20 % против 48 %). Эта находка подчеркивает необходимость использования АНФ для ранней диагностики СЗСТ. Антитела к ЭНА у лиц с подозрением на аутоиммунную патологию были обнаружены в 34 % образцов совместно с АНФ. Изолированно антитела к ЭНА были обнаружены только у 5,5 % (28/507) пациен тов, что указывает на роль тестов для их выявления в определении тех разновидностей АНА, которые утрачиваются из ядра клетки в ходе фиксации, либо плохо распознаются при микроскопии (см. рис. 2). Наряду с определением АНФ и антител к ЭНА мы исследовали данные образцы с помощью лайнблота. Частота положительных результатов лайнблота в зависимости от титров АНФ представлена в таблице 4. В образцах, положительных по антителам к ЭНА, но отрицательных по АНФ антитела к растворимым SS-A/SS-B антигенам отмечались в 64% (18/28) случаев, в образцах положительных по АНФ и анти-ЭНА — в 46 % (136/298) случаев. Кроме того, в двух образцах, изолированно положительных по антителам к ЭНА были обнаружены антитела к Jo-1 антигену, который располагается в цитоплазме клеток и может быть неразличим при микроскопии. Полученные результаты сопоставимы с данными литературы. Специфичность АНА с помощью метода лайнблота была установлена в 63 % образцов, положительных по АНФ и в 97 % образцов, положительных по антителам к ЭНА. Таким образом, специфичность АНА с помощью используемых методов не может быть установлена в 37 % АНФ-положительных образцов, что не исключает диагностической ценности выявления АНФ. Лайнблот оказывается отрицательным у большинства пациентов с низкими титрами АНФ, что совпадает с данными, полученными другими авторами. Таким образом, выполнение лайнблота у пациентов с отрицательным или низким результатом АНФ и отсутствием антител к ЭНА нецелесообразно. Выявление антител к дсДНК обладает высокой сходимостью с результатами определения АНФ и антител к ЭНА. При выявлении АНФ и/или антител к ЭНА вероятность обнаружения антител к дсДНК составляет около 30 %, что позволяет рекомендовать антитела к ДНК в качестве теста «второй линии» при обследовании пациентов с системными заболеваниями, после обнаружения АНФ или антител к ЭНА. Чувствительность ИФА тест-систем по определению антител к дсДНК у различных производителей значительно варьирует, несмотря на то, что для стандартизации данных тестов используется референтная сыворотка Всемирной Организации Здравоохранения (ВОЗ) Wo80. По нашим данным, разница в чувствительности тестов составила 56 % и 38 % в зависимости от производителя. Наряду с методом ИФА в диагностике антител к дсДНК используется метод нРИФ с использованием простейших рода Crithidia lucilliae. Несмотря на сравнительно низкую чувствительность данного метода, этот тест по-прежнему рекомендуется в качестве подтверждающего теста, позволяющего объективизировать выявление антител к дсДНК. Полученные нами данные позволяют рекомендовать сочетанное выявление АНФ методом нРИФ и теста для определения антител к смеси ЭНА в качестве серологического лабораторного скрининга системных заболеваний соединительной ткани. Отрицательный результат обоих методов указывает на отсутствие АНА и делает диагноз СЗСТ маловероятным и не требует дальнейшего применения тестов второй линии, к которым может относиться определение АНА методом лайнблота, метод твердофазного ИФА с раздельными антигенами или методами мультиплексного анализа. При выявлении АНФ или антител к ЭНА рекомендуется использование методов определения специфичности АНА, к которым относится метод лайнблота и определение антител к дсДНК. Проведенный нами финансовый анализ эффективности такого подхода показывает, что использование данного алгоритма сокращает затраты на обследование одного пациента с подозрением на СЗСТ на 33,5 %. Кроме того, последовательное назначение тестов повышает диагностическую эффективность, поскольку снижает число ложноположительных результатов обследования.

    Среди СЗСТ по встречаемости АНА системная склеродермия (ССД) даже опережает СКВ, поскольку АНФ отмечается у 95-100 % пациентов с этим заболеванием. К настоящему времени, при ССД описано около 30 антигенных мишеней АНА, причем выявление ряда специфичностей АНА может определять как особенности поражения внутренних органов, так и прогноз заболевания. В большинстве ИФА и блот-тестов обычно присутствует ограниченный спектр антигенов, представленный Scl-70 и CENT-B антигенами, определяющий предрасположенность к диффузной и лимитированой форме заболевания. Фирма Euroimmun AG впервые выпустила набор реагентов, основанный на методе лайн-блота для выявления антител к широкому спектру антигенов, характерных для ССД. С помощью него кроме антигенов Scl-70 и CENT-А и B, входят также антигены РНК-полимераз (RP11 и RP155) которые отмечаются при тяжелом течении ССД, антитела к Th/To, встречающимися при мягкой клинической форме ССД. Также в лайнблоте представлены антигены, характеризующие перекрестные синдромы, в частности Ku, антитела против которого отмечаются при СКВ с симптоматикой ССД и антигены PM-Scl 75кДа и 100 кДа, являющиеся маркером сочетания ССД и полимиозита. Также в состав блота входят ряд антигенов ядрышка (фибрилларин и NOR90), а также антигены PDGFR и Ro-52. Для выявления АНА нами были обследованы 67 больных ССД проходивших стационарное лечение в условиях специализированного ревматологического отделения. В исследованной группе антинуклеарный фактор (АНФ) был выявлен у 100 % (67 /67) пациентов, причем преобладали центромерный и ядрышковый типы свечения ядра. Антитела против Scl-70 и/или анти-CENP-В, которые присутствуют в большинстве тест систем для диагностики системных заболеваний, отмечались в 28 % (19/67) и 34 % (23/67) соответственно, а хотя бы одно из этих антител было обнаружено в 61 % случаев. Использование расширенного лайнблота, содержащего 12 аутоантигенов, позволило определить специфичность АНА в 94 % (63/67), т. е. позволяет увеличить число положительных серологических находок более чем на треть. Таким образом, несмотря на тенденции к автоматизации и попыткам упрощения тестов для серологической диагностики СЗСТ на сегодняшний день наилучшей комбинацией лабораторного тестирования для определения АНА является сочетание выявления АНФ и выявления специфичностей АНА с помощью метода лайнблота с максимально широким спектром аутоантигенов. 

    Антинуклеарные антитела (ANA)

    Аntinuclear antibody (ANA)

    Антинуклеарные антитела — это группа аутоантител, реагирующих с различными компонентами ядра. Определение антител к нуклеарным антигенам в сыворотке — тест на системные заболевания соединительной ткани.

    Основная цель исследования — исключить СКВ, поскольку при этом заболевании АНА выявляются у 95% больных в течение 3 месяцев после его начала.

    Определение АНА имеет большое значение для диагностики АИЗ соединительной ткани, наличие данных антител может быть связано с СКВ, РА, СЗСТ, склеродермией, полимиозитом, дискоидной красной волчанкой, синдромом CREST, узелковым периартериитом, дерматомиозитом. При СКВ тест на выявление антинуклеарного фактора обладает высокой чувствительностью (89%), но умеренной специфичностью (78%), по сравнению с тестом на определение антител к нативной ДНК (чувствительность — 38%, специфичность — 98%). Корреляции между высотой титра и клиническим состоянием больного нет. Антинуклеарные антитела входят в состав 11 критериев диагностики СКВ Американского колледжа ревматизма.

    Клеточное ядро содержит более 100 различных антигенов (нуклеиновых кислот, гистонов, белков ядерной мембраны, компонентов сплайсосомы, рибонуклеопротеинов, белков ядрышек и центромер и пр.). АNА могут быть разделены на три группы:

    *SS-A (Ro) и SS-B (La) могут локализоваться как в цитоплазме, так и в ядрах.

    Положительный результат тестов указывает на наличие у больного одной или сочетания нескольких разновидностей АNА. Отрицательный результат такого теста более чем в 95% случаев позволяет исключить СКВ, лекарственную волчанку (ЛКВ), СШ, СЗСТ, системный склероз, ДМ и ПМ.

    Метод исследования:

    Иммунофлюоресцентный метод

    Иммунофлюоресцентный метод

    Правила подготовки:

    Общеклинические и биохимические исследования крови

    • Важным условием обеспечения качества лабораторного исследования крови является взятие материала натощак, в утреннее время (до 12:00).
    • За 12 часов до исследования следует исключить прием алкоголя, курение, прием пищи, ограничить физическую активность.
    • Утром в день взятия крови на исследование можно выпить воду.
    • Исключить прием лекарств; если отменить прием лекарств невозможно, необходимо проинформировать об этом лабораторию.
    • Взятие материала желательно проводить до проведения любых медицинских диагностических манипуляций.
    • При оценке уровня гормонов у женщин важно учитывать день менструального цикла, когда наиболее оптимально определять некоторые гормоны. Эту информацию Вы можете получить у лечащего доктора.

    Общеклинические и биохимические исследования крови

    Общеклинические и биохимические исследования крови

    Общеклинические и биохимические исследования крови

    Материал для исследований:
    Венозная кровь
    Материал для исследований:Транспортная среда:
    Вакутайнер с/без антикоагулянта с/без гелевой фазы
    Вакутайнер с/без антикоагулянта с/без гелевой фазы

    ПоказательХарактеристикаИнтерферирующие факторы. МедикаментыПоказания к назначениюИнтерпретация результатов
    Анализатор и тест-системаФлюоресцентный микроскоп Eurostar III Plus; EUROIMMUN (Германия)
    Референтные значения, Титр< 1/100 -- отрицательный
    Повышают
    Аминосалицилаты, карбамазепин, хлорпромазин, изониазид, альдомет, метилдопа, прокаинамид, йодиды, оральные контрацептивы, тетрациклины, тиазидные диуретики, сульфаниламиды
    Маркер аутоиммунных заболеваний соединительной ткани, тест скрининга
    • Диагностика и дифференциальная диагностика аутоиммунных заболеваний соединительной ткани (особенно СКВ)
    Повышение уровня
    • СКВ -- активная форма 98-100% +++ (титр);
    • дискоидная красная волчанка 40% ++/+++;
    • лекарственная волчанка 100% ++;
    • системная склеродермия 70% ++/+++;
    • синдром Шегрена 60% ++/+++;
    • смешанное заболевание соединительной ткани 100% ++/+++;
    • болезнь Рейно 60% ++/+++;
    • РА 40% +/++;
    • ЮРА 20% +/++;
    • полимиозит и дерматомиозит 30% +;
    • узелковый полиартрит 17% +;
    • здоровые:
    - до 40 лет 3% +; - после 40 лет 25% +;
    • инфекционный мононуклеоз;
    • острый, хронический лейкоз;
    • приобретенная гемолитическая анемия;
    • болезнь Вальденстрема;
    • цирроз печени;
    • гепатит;
    • малярия;
    • лепра;
    • ХПН;
    • миастения;
    • тимома;
    • лимфопролиферативные заболевания

    Анализатор и тест-система

    Флюоресцентный микроскоп Eurostar III Plus; EUROIMMUN (Германия)

    Референтные значения, Титр

    Интерферирующие факторы. Медикаменты

    Аминосалицилаты, карбамазепин, хлорпромазин, изониазид, альдомет, метилдопа, прокаинамид, йодиды, оральные контрацептивы, тетрациклины, тиазидные диуретики, сульфаниламиды

    Маркер аутоиммунных заболеваний соединительной ткани, тест скрининга

    Интерпретация результатов

    - до 40 лет 3% +; - после 40 лет 25% +;


    Смотрите также




    © 2012 - 2020 "Познавательный портал yznai-ka.ru!". Содержание, карта сайта.